RNAzol Plus Reagent (Trizol)核酸提取
與傳統(tǒng) Trizol 提取方法相比,RNAzol Plus 不需要使用氯仿進行分層,操作更簡單,且全程可在常溫進行。RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免氯仿,具有和Trizol類似的適用范圍,可以從動物組織、培養(yǎng)細胞、植物材料、真菌、細菌及各種微生物等樣品中提取總RNA。RNAzol Plus Reagent (Trizol)核酸提取
免氯仿總 RNA 提取試劑RNAzol Plus Reagent (NO Chloroform)
RNAzol Plus Reagent (Trizol)核酸提取
目錄號:91021
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91021-100 |
RNAzol Plus Reagent | 100 ml |
自備試劑
異丙醇、RNase-Free H2O、75%乙醇(使用 RNase-Free H2O 配制)
保存條件
在室溫下能穩(wěn)定保存12個月。盡管如此,為達到最佳效果,我們建議保存在2 ~ 8℃。
產(chǎn)品簡介
與傳統(tǒng) Trizol 提取方法相比,RNAzol Plus 不需要使用氯仿進行分層,操作更簡單,且全程可在常溫進行。
RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免氯仿,具有和Trizol類似的適用范圍,可以從動物組織、培養(yǎng)細胞、植物材料、真菌、細菌及各種微生物等樣品中提取總RNA。
本產(chǎn)品提取的RNA沒有DNA和蛋白的污染,可以直接用于cDNA克隆、RT-qPCR檢測、mRNA 純化、體外翻譯、Northern blotting雜交、高通量測序等各種分子生物學實驗。
RNAzol Plus 既可用于小量樣本(50-100mg 組織、5×106細胞)的總RNA提取,又可用于大量樣本(≥1g組織、≥107細胞)的總RNA提取。
注意事項
1) RNA在裂解液RNAzol Plus中時不會被RNase降解,但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的吸頭,建議直接購買GeneBetter商品化的RNase-Free的吸頭。研缽用水che底洗凈,在150℃烘干即可。
2) 樣品應避免反復凍融,否則會影響RNA的提取得率和質(zhì)量。
3) 樣品加入裂解液RNAzol Plus勻漿后,樣品可在–80℃保存一個月以上。
4) 取RNA樣本時,把新鮮組織樣本浸入RNAsafe(RNA樣品保存液,91115-100)中,可在 37℃保存一天,在25℃保存一周,在4℃保存一個月,在-20℃或者–80℃長期保存。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
操作步驟
提示:所有離心步驟均需要在室溫(15 ~37℃)下進行,提取效果更佳!
1. 材料處理:
a.植物組織(植物、真菌):取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織jian碎后在 RNAzol Plus 中研磨。每20-50mg組織加0.5ml裂解液RNAzol Plus,劇烈渦旋震蕩20 sec,混勻。
b.動物組織:取新鮮或-70℃凍存組織,每15-50mg 組織加 0.5ml裂解液 RNAzol Plus,用勻漿儀進行勻漿處理?;?qū)⒔M織在液氮中磨碎后加入RNAzol Plus,劇烈渦旋震蕩 20 sec,混勻。
c. 單層貼壁培養(yǎng)細胞:吸去培養(yǎng)液,加入適量裂解液RNAzol Plus,每10cm2加0.5ml 裂解液RNAzol Plus,(例如:3.5cm培養(yǎng)皿加0.5ml RNAzol Plus), 用移液器反復吹打幾次,裂解細胞。
d.細胞懸液(動物細胞、植物、酵母、細菌):離心收集細胞,棄上清,每5×106個細胞加0.5ml裂解液RNAzol Plus。加裂解液 RNAzol Plus 前不要洗滌細胞,以免降解 mRNA。
e.血液(血液、血漿、血清):每 200 ul(低于 200 ul 時,可用 RNase-free H2O 補足)血液、血漿、血清等液體樣本,加入0.5ml RNAzol Plus后,劇烈渦旋震混勻 。
2. 加入200ul RNase-free H2O(RNAzol Plus 體積的0.4倍),蓋好管蓋,劇烈振蕩混勻,室溫放置5min。
3. 室溫12,000rpm離心15min,樣品將分為二層,下層沉淀和上層水相,RNA主要在上層水相(約630 ul)中,轉(zhuǎn)移500 ul水相到一新的離心管中。
注意:提取微量樣本時,如果不出現(xiàn)分層,則轉(zhuǎn)移全部上清。
4. 在得到的水相溶液中加入等體積的異丙醇,顛倒混勻,室溫放置 10 min。
5. 室溫 12,000 rpm 離心 10 min,通??梢钥吹桨咨恋恚瑮壣锨?。
(離心前 RNA 沉淀通常是看不見的,離心后在管側(cè)或管底成薄片狀沉淀。)
6. 加入1ml 75%乙醇洗滌沉淀,渦旋震蕩15sec,讓沉淀懸浮起來,并上下顛倒數(shù)次。
7. 室溫 12,000 rpm 離心3分鐘,倒出上清,注意不要倒出沉淀,剩余的少量液體短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。
8. 可選步驟:重復步驟6和7一次,可增加純度。
9. 室溫放置約1分鐘,晾干。加入50~100 ul的RNase-Free ddH2O,吹打混勻,充分溶解RNA。
10. 得到的RNA,可立即用于下游實驗,或于-70℃保存,防止降解。
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